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 技術(shù)文章
選多肽還是蛋白作為抗原
作者:江蘇鎮江厚普生物科技有限公司  來(lái)源:  發(fā)表時(shí)間:[2011-3-8]  點(diǎn)擊:4303

需要根據抗體應用于什么實(shí)驗,以及您所能獲得的材料來(lái)決定。

1. 實(shí)驗過(guò)程中蛋白處于天然狀態(tài),這時(shí)使用的抗體識別的一般是蛋白的構象表位和線(xiàn)性表位;這樣的實(shí)驗主要有CO-IP、FACS、Neutralizing/Blocking以及ELISA法檢測天然蛋白等;

2. 實(shí)驗過(guò)程中蛋白處于變性或半變性狀態(tài),這時(shí)大部分的構象表位已被破壞,抗體識別的一般都是線(xiàn)性表位;這樣的實(shí)驗主要有:Western、IHC/ICC/IF等以多肽作為抗原制備的抗體,識別的是線(xiàn)性表位,在使用時(shí)蛋白處于變性或半變性狀態(tài)下,結果可以令人滿(mǎn)意;但不能夠保證識別天然蛋白以蛋白作為抗原制備的抗體,識別蛋白的線(xiàn)性和構象表位,基本上所有的實(shí)驗都可以應用,所以,用蛋白作為抗原應是首選,但是在多肽抗原已可滿(mǎn)足實(shí)驗要求而且得到蛋白有一定難度的情況下,以多肽作為抗原制備抗體更加合適。

3. 如果提供全氨基酸序列的話(huà),就可以表達蛋白;如果提供的只是多肽序列的話(huà),那么只能合成多肽,但是一般來(lái)說(shuō),用完整的蛋白比用多肽免疫的效果要好,而且多肽免疫后的血清不保證一定可以識別完整的抗原。因為肽只是一個(gè)線(xiàn)性序列,而且是人工合成的,所以針對這個(gè)肽的抗體能否識別天然蛋白是不確定的,所以在制備抗體之前,對肽的設計很重要。

 

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